Клонирование кДНК S100B в E. coli под контролем индуцибельного промотора, и ее гетерологичная экспрессия
DOI:
https://doi.org/10.25557/2310-0435.2018.04.148-152Ключевые слова:
гетерологичная экспрессия кДНК, рекомбинантный белок S100B, векторная система pBT7-N-His, стратегия клонирования и экспрессии, Genome compiler, фолдинг белка, дисульфидные связи, аналитическая и препаративная экспрессия белков, металл-аффинная хроматография белковАннотация
В работе разработана стратегия клонирования и экспрессии кДНК S100B с использованием эффективной и многофункциональной онлайн программы Genome compiler на основе векторной системы pBT7-N-His, имеющей промотор РНК-полимеразы фага Т7, участок клонирования и экспрессии с ключевыми элементами контроля и регуляции процессов транскрипции и трансляции. Экспрессия белка S100B подтверждена процедурой SDS-ПААГЭ по молекулярной массе выявленных на электрофорезе полос с динамикой накопления относительно контроля при увеличении времени инкубации после индукции с IPTG. Полученная гетерологичная экспрессия белка S100B с сохранением основных физико-химических свойств и биологической активностью открывает хорошие перспективы его применения в качестве информативного маркера состояний организме в норме и при патологии, и в качестве ценного объекта направленной терапии.
